Il protagonista del nuovo gioco è un nobile fiorentino, antenato di Desmond Miles e discendente di Altair, di nome Ezio Auditore.
L' avventura inizia nell'anno 1486, in epoca rinascimentale. Oltre ad essere dotato di due lame, il "nuovo Altair" non si è sottoposto al rito del taglio delle dita per permettere la fuoriuscita delle lame dai pugni, quindi le userà in maniera diversa da quanto visto nel primo episodio.
Nel corso dell'avventura è possibile vedere location quali la Basilica di San Marco, il Canal Grande e il Ponte di Rialto, ma potremo visitare anche alcuni luoghi della campagna Toscana.
Ezio Auditore potrà spostarsi a piedi o a cavallo, mentre a Venezia avrà la possibilità di nuotare nei canali e restare immerso finché il suo fiato glielo permetterà.
Sono implementate nuove azioni di gioco che il protagonista può sfruttare, come ad esempio uccidere un nemico silenziosamente. Ezio dispone di nuove armi, tra cui un'ascia, una mazza, un martello, una lancia, un paio di spade e due diversi tipi di piccole lame, tutte dotate di caratteristiche diverse. E' possibile anche sottrarre le armi al nemico ucciso, aprendo così ad una vasta gamma di scelta.
Le giornate scorrono fra giorno e notte, e le 16 missioni disponibili, differenti fra di loro, scompariranno e compariranno nel corso del gioco a seconda della reputazione di Ezio. Quest'ultimo incontrerà durante il gioco personaggi storici fra cui Machiavelli, Caterina Sforza e Lorenzo de Medici e potrà visitare il laboratorio di Leonardo da Vinci, incontrandolo insieme alla Gioconda.
Genere  | Adventure |
| Piattaforma | PS3 |
| Editore | UBISOFT |
| Lingua del manuale | Multilingua |
| Lingua del gioco | Italiano |
| Numero minimo giocatori | 1 |
| Numero massimo giocatori | 1 |
| PEGI Rating | 18 |
| Modalità di gioco online | No |
| Supporto | |
| Data di uscita | 2009-11-19 |
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